Здравствуйте, для начала скажу что мне 28 лет женат половая жизнь регулярная. Теперь о болезни, уже с год у меня болит левое яичко точнее не яичко а то что находится над яичком "надяичник" наверное. Вначале он был мягкий и небольшой теперь увеличился в размерах до трети яичка отвердел и болит ужасно, особенно вечерами. Я ходил кврачу урологу в местной поликлинике рассказал все как есть он поставил диагноз - нарушено кровоснабжение, прописал Троксевазин в таблетках и мазь. Я пропил и промазал полный курс но боль как была так и осталась совершенно ничего не изменилось. Подскажите пожалуйста что у меня и с чем мне конкретно идти к врачу, есливам конечно достаточно той информации что я сообщил.
И. У. Оостерхуис, М. К. Мостерт, Л. Х. И. Лоойенга,
Роттердам, Нидерланды
Опухоли половых клеток человека представляют собой гетерогенную группу новообразований, происходящих, по- видимому, из примордиальных половых клеток. Они в основном встречаются в гонадах, но могут также образовываться и в определенных внегонадных сайтах. Такая локализация объясняется миграционными путями примордиальных половых клеток, которые образуясь в энтодерме желточного мешка 4- х недельных эмбрионов, мигрируют вдоль дорзального мезентерия в область генитальной складки. У мужчин герминогенные опухоли могут развиваться как в яичке, так и крестцово- копчиковом отделе, забрюшинном пространстве, а также в средостенье (Mostofi 1998; Scully 1979 ). У подростков и взрослых (включая лиц старшего возраста) герминогенные опухоли в основном образуются в яичке, в то время как у новорожденных и детей младшего возраста их главным образом обнаруживают в крестцовом отделе, основнм месте локализации данного типа опухолей у женщин.
На основании данных гистологии, возраста пациента, а также биологии опухолей все герминогенные опухоли яичка могут быть разделены на три группы (клинико- морфологические категории) (Oosterhuis, Looijenga, et al. , 1997):
• Герминогенные опухоли новорожденных и детей младшего возраста (GCTI): тератомы и опухоли желточного мешка
• Герминогенные опухоли подростков и юношей (TGCT): семиномы и несеминомные опухоли
• Герминогенные опухоли пожилых (SS): сперматоцитные семиномы
В следующих параграфах будут рассмотрены основные характеристики данных групп, а также современные взгляды на их генетические взаимоотношения.
Герминогенные опухоли яичка новорожденных и детей младшего возраста (GCTI).
GCTI обнаруживаются в раннем детском возрасте с частотой 0. 12 на 100. 000 (Looijenga 1999). В большинстве случаев они возникают во внегонадных сайтах, преимущественно, в крестцовом отделе (45% ), и в редких случаях в яичке (6% ). Гистологически GCTI представляют собой тератомы, или опухоли желточного мешка. Тератомы (TE) являются доброкачественными опухолями и поэтому в качестве лечения может применяться лишь орхиэктомия. Опухоли желточного мешка возникают чаще, чем TE (4 : 1) (Harms and Janig 1986), являются злокачественными, и их лечение может потребовать проведения дополнительной химиотерапии.
В отличии от ситуации с герминогенными опухолями яичка подростков и взрослых (TGCT; см. ниже), для которых показано, что их предшественниками являются внутриэпителиальные карциномы (carcinoma in situ, CIS) (Skakkebaek et al. , 1987), в данном случае убедительных доказательств о связи GCTI с CIS не имеется. Герминогенные опухоли крестцово- копчикового отдела обычно представляют собой крупные доброкачественные тератомы, появляющиеся вскоре после рождения и отмечающиеся чаще всего у лиц женского пола. Дети в возрасте стрше 6- и лет имеют больший риск развития злокачественной опухоли желточного мешка как из предшествующей тератомы, так и на месте не полностью удаленной тератомы (Perlman et al. , 1994).
Методом проточной цитометрии было показано, что тератомы в основном диплоидны (Silver et al. , 1994; Stock et al. , 1995; Hoffner et al. , 1994), в то время как опухоли желточного мешка могут быть анеуплоидными, в большинстве случаев - почти тетраплоидными (Oosterhuis et al. , 1989; Kommoss et al. , 1990; Perlman, Cushing et al. , 1994; Jendery et al. , 1995). Разница в плоидности была подтверждена цитогенетически: FISH- анализ и кариотипирование показали отсутствие хромосомных аберраций в тератомах и наличие значительных аберраций хромосом в опухолях желточного мешка. Связано ли отсутствие хромосомных аберраций в тератомах с потерей опухолевых клеток в процессе культивирования, пока не известно. Кариотипирование опухолей желточного мешка выявило аномалии в коротком плече хромосомы 1 (частичная потеря района p36), длинном плече хромосомы 6, а также аномалии в районе 3p (Kaplan et al. , 1979; Oosterhuis et al. , 1988; Oosterhuis et al. , 1993; Hoffner, Deka et al. , 1994; Perlman, Cushing et al. , 1994; Bussey et al. , 1999). FISH- анализ клеток опухолей желточного мешка подтвердил наличие аберраций в хромосоме 1, а так же показал изменение числа копий для хромосом 8, 10, 12, 17 и X (Hu 1992; Stock et al. , 1994; Jenderny, Koester et al. , 1995; Perlman et al. , 1996).
Недавно опухоли желточного мешка из семенников детей раннего возраста были проанализированы с помощью CGH- технологии. Несмотря на то, что число проанализированных случаев было невелико, в них была выявлена сходная картина хромосомного дисбаланса (вовлеченные районы помещены в скобки). Во всех случаях была выявлена потеря части хромосомного материала областей 4q(23- 33) и 6q(16- 22), в сочетании с приобретением материала в области 20q. По крайней мере в трех случаях выявлены : потери части хромосомного материала в области 1p(21- 31) в сочетании с приобретением хромосомного материала в областях 3p(22- 24), 9q(34), 12p(12- 13), 17q(22- 25), 19q(13) и 22(13).
Кроме четырех опухолей желточного мешка нами были обследованы случаи прогрессии крестцовых тератом в опухоли желточного мешка. Выявленная картина хромосомных аберраций была очень сходна с таковой для опухолей яичка. Эти данные хорошо согласуются с более ранними кариотипическими исследованиями (Perlman, Cushing et al. , 1994; Bussey, Lawce et al. , 1999) и указывают на то, что генетическая конституция этих опухолей в большей степени определяется гистологией, а не анатомической локализацией.
В одном случае опухоли желточного мешка был показан высокий уровень амплификации района 12q12- q14 области, как известно, содержащей ген MDM2. Известно также, что MDM2 образует комплекс с P53, приводя к ингибированию функции последнего (Haupt et al. , 1997; Lane and Hall 1997; Midgley and Lane 1997). В связи с этим, используя иммуногистохимический подход, мы исследовали наличие в данных опухолях MDM2 и P53. Наши данные показали, что в опухолях желточного мешка и тератомах продуцируются MDM2, в то время как продуктов гена P53 обнаружено не было. Соответственно, в этих опухолях не было обнаружено мутаций в экзонах 5- 8 гена P53. Эти данные показывают, что инактивация гена P53 в этих опухолях происходит не на генетическом, а на биохимическом уровне (Prives 1998).
Поскольку в хромосомные аберрации в тератомах обнаружены не были, наши данные не дают новых сведений о возможных взаимоотношениях между опухолями желточного мешка и тератомами. Предположение о том, что тератомы могут прогрессировать в опухоли желточного мешка, сделанное на основании исследования крестцовых тератом (Gonzalez- Crussi 1982), нуждаетс в дальнейшем подтвердении с использованием животных моделей (Van Berlo et al. , 1990).
Герминогенные опухоли яичка у подростков и взрослых (TGCT)
Гистология, клиническая характеристика и модели прогрессии
Клинически и морфологически TGCT могут быть разделены на два типа : семиномы (SE) и несеминомы (NS). SE обычно проявляются у мужчин в возрасте 35- и лет, в то время как NS как правило проявляется лет на десять раньше. SE состоят из неопластических аналогов первичных половых ктеток. NS могут состоять из эмбриональных тканей (эмбриональная карцинома, незрелая и зрелая тератома) и/ или внеэмбриональных тканей (опухоль желточного мешка и хориокарцинома). Из всех TGCT, 40% составляют NS, и 50% - SE. Остальные TGCT состоят из компонентов обоих типов опухолей и классифицируются согласно Британской классификации как смешанные опухоли (CT), или как NS согласно классификации ВОЗ (Mostofi, 1998).
SE обычно менее агрессивны по сравнению с NS, хотя агрессивность последних зависит от гистологического подпипа. Общий уровень вылечиваемости пациентов с TGCT высок, но до сих пор 10% больных умирает от данной болезни. Процент смертности может быть снижен применением интенсивного лечения. До настоящего времени не существует надежных факторов, способных предсказать результаты лечения (Bokemeyer and Schmoll 1995).
Считается, что общим предшественником SE и NS являются CIS (Skakkebaek, Berthelsen et al. , 1987), состоящие из интратубулярных раковых клеток, напоминающих клетки SE. Экстраполяции основанные на наблюдениях пациентов с диагнозом CIS без инвазивного TGCT показывают, что CIS всегда прогрессирует в инвазивные TGCT (Giwercman et al. , 1993; Burke and Mostofi 1988; Dieckmann and Loy 1993). Первоначальная экспансия CIS клеток обнаруживается как интратубулярная или микроинвазивная семинома.
Существуют две основные модели развития CIS в TGCT. Согласно одной различные гистологические варианты TGCT возникают независимо (Sesterhenn 1985), в то время как другая модель предполагает, что SE является промежуточной стадией между CIS и различными несеминомными опухолями (Oosterhuis et al. , 1989; Oliver 1987). Цитогенетические исследования, показавшие наличие одинаковых хромосомных аберраций в SE и в NE компоненте CT (Van Echten- Arends et al. , 1995; Haddad et al. , 1988) свидетельствуют в пользу последней модели. Недавно выдвинутая гипотеза о том, что на каждой стадии развития TGCT может происходить перепрограммирование клеток CIS или семиномы в полипонентные эмбриональные раковые клетки, являющиеся стволовыми клетками несеминомных опухолей, (Oosterhuis et al. , 1997) также не противоречит второй модели. Высказывается предположение, что шанс перепрограммирования CIS и SE в NS уменьшается с возрастом, что объясняет факт клинического проявления несеминомных опухолей в более раннем возрасте по сравнению с семиномами (Oosterhuis, Castedo et al. , 1989).
Хромосомная конституция
Методом проточной цитометрии было показано, что TGCT представляют собой анеуплоидные клетки, причем клетки SE гипертриплоидны, а клетки NS - гипотриплоидны (Oosterhuis, Castedo et al. , 1989; Fossе et al. , 1991; el- Naggar et al. , 1992). Механизм полиплодидизации в данном случае отличается от такового, описанного для большинства раковых клеток, которые развиваются согласно модели опухолевой прогрессии, предложенной Nowell (Nowell 1976; Nowell 1986). Эта модель описывает клональную эволюцию популяции опухолевых клеток, начинающуюся с диплоидных клеток, которые развиваются в сторону увеличения числа наборов хромосом. В случае же TGCT этот механизм состоит в полиплоидизации с последуюими локальными потерями хромосомного материала. Предрасположенность клеток TGCT к полиплоидизации может быть связана с их происхождением из первичных половых клеток. Эти клетки могут быть особенно склонны к полиплоидизации, поскольку они обладают высокой митотической активностью и тенденцией к образованию мехромосомных мостов. Известно, что патогенгез TGCT включает определенный механизм образования хромосомных мостов (Gondos 1993).
Полиплоидизация с последующими локальными потерями хромосом в TGCT в результате дают специфический паттерн хромосомных наборов, который выявляется кариотипированием (De Jong et al. , 1990; Castedo et al. , 1989; Van Echten- Arends et al. , 1995). Эти исследования показали, что на фоне триплоидного индекса ДНК в клетках SE и NS имеется избыток хромосом 7, 8, 12 и Х при недостатке хромосом 11, 13, 18 и Y. Другими часто встречающимися хромосомными аномалиями являются потери хромосом 4, 5 и 9, избыток хромосомы 21. С меньшей частотой (< 20% ) встречаются делеции или аберрации в районах 1p21- 26; 6q14- 25; 7q11- q36 и 12q12- 24 (Murty and Chaganti 1998). Однако, эти хромосомные аберрации с одной стороны не всегда обнаруживаются в данных типах опухолей, а с другой - обнаруживаются в других опухолях, указывая на то, что эти события имеют отношение к опухолевой прогрессии. Несмотря на то, что в SE и NS обнаруживаются однотипные хромосомные пересторойки, специфической чертой SE является значительно большее, чем в NS число копий хромосом 7, 15, 19 и 22, наряду с уменьшенным числом копий хромосомы 17 (Van Echten- Arends et al. , 1995).
Другой отличительной чертой TGCT является сверхпредствленость короткого плеча хромосомы 12, наблюдаемая в большинстве случаев в виде изохромосомы i (12p; рис. 4). Данная изохромосома была впервые описана в 1982 г. (Atkin and Baker 1982). Она обычно обнаруживается в 80% TGCT (De Jong, Oosterhuis et al. , 1990). Общность происхождения обоих хромосомных плечей (Sinke et al. , 1993) говорит в пользу преположения, что i (12p) хромосома скорее образовалась в результате неправильного деления центромеры, чем как результат не- сестринского хроматидного обмена (Mukherjee et al. , 1991). Несмотря на то, что в клетках TGCT всегда присутствуют аберрации 12p, образованию i хромосомы всегда предшествует полиплоидизация. Доказательством этого служит сохранение гетерозиготности по 12p в i- позитивных TGCT (Geurts van Kessel et al. , 1989).
Идея о том, что сверхпредставленность короткого плеча хромосомы 12 играет важную роль в развитиии TGCT была подтверждена гибридизацией in situ (Suijkerbuijk et al. , 1993; Samaniego et al. , 1990). Показано также, что сверхпредставленность 12p наблюдается и в i- негативных TGCT.
Данные кариотипирования. представленные выше получили дальнейшее подтверждение недавними экспериментами с использованием CGH- технологии (Korn et al. , 1996; Mostert et al. , 1996; Ottesen et al. , 1997; Summersgill et al. , 1998; Rosenberg et al. , 1999).
Более того, амплификация определенной области короткого плеча хромосомы 12 в семиномных метастазах (Suijkerbuijk et al. , 1994).
Протоонкогены и супрессорные гены
Молекулярные исследования TGCT находятся в начальной стадии. Для болучения большей информации о возможной роли супрессорных генов, во многих исследованиях проводился анализ потери гетерозиготности (LOH). Несмотря на то, что получены не всегда согласующиеся данные, в части исследований подтвердились результаты. полученные с помощью цитогенетических методов, т. е. , делеции областей, включающих район 1p (Mathew et al. , 1994), 5q (Peng et al. , 1995; Murty et al. , 1994; Peng et al. , 1999) and 12q (Murty et al. , 1992).
Обнаружены также горячие точки делеций, включающие генs DCC (18q21) и RB1 (13q14) (Murty et al. , 1994). Аберрации других протоонкогенов и супрессорных генов в TGCT встречаются редко: MYC (c- MYC; 8q24, N- MYC; 2p24), c- KIT (4q11- 12) и P53 (17p13) (Lothe et al. , 1995), K- RAS (12p12) (Dmitrovsky et al. , 1990) и NME1 (17q22) (Schmidt et al. , 1997).
На уровне РНК обнаружено увеличение экспрессии таких проктоонкогенов как: c- KIT (Rajpert- De Meyts and Skakkebжk 1994; Strohmeyer et al. , 1995), N- MYC, c- MOS (Shuin et al. , 1994), циклин D2 and K- или N- RAS (Houldsworth et al. , 1997; Houldsworth et al. , 1997). Обнаружено также снижение или отсутствие экспресии таких онкогенов как: RB, DCC (Murty, Li et al. , 1994), INT- 2 (Shimogaki et al. , 1993; Yoshida et al. , 1988) и c- eERB- 1 и 2 (Shuin, Misaki et al. , 1994).
Поскольку за единственным исключением (Murty et al. , 1994) в данных типах опухолей не было обнаружено нестабильности микросателлитных последовательностей, считается. что дефекты репарации генов не играют роли в пргрессии TGCT (Lothe, Peltomaeki et al. , 1995).
Семйные случаи TGCT
Эпидемиологические исследования и анализ сцепления позволяют предположить, что треть пациентов с TGCT характеризуется генетической предрасположенностью (Nicholson and Harland 1995). В нескольких исследованиях делались попытки идентифицировать районы хромосом, несущие чувствительные гены. Анализ сцепления проведенный в 50 семьях с использованием 221 маркера (Leahy et al. , 1995) показал, что такими районами могут являться определенные области хромосом 1, 4 (2 области), 5, 14 и 18. Сравнение полученных результов с данными представленными International Testicular Cancer Linkage Consortium позволяет предположить, что данные гены вероятно локализуются в хромосомах 3. 5. 12 и 18. К сожалению, не имеется данных о локализации генов предрасположенности, что может объясняться генетической гетерогенностью (действие разных генов проводит к одному конечному результату).
Герминогенные опухоли людей старшего возраста
Третий типом герминогенных опухолей, диагносцируемом в яичке является сперматоцитная семинома (SS), как правило обнаруживаемая у мужчин старше 50- и лет. Подобные опухоли никогда не возникают во внегонадных сайтах и в большинстве случаев прогноз благоприятный (Talerman 1980; Burke and Mostofi 1993). Фенотипически SS характеризуются клеточной гетерогенностью. Морфологически они могут напоминать SE (Talerman 1980). В отличае от SE, SS являются производными более дифференцированных клеток, а именно, B сперматогониев B (Masson 1946; Romanenko and Persidskii 1983; Rosai et al. , 1969). Как правило в случае SS в прилежащей паренхиме не обнаруживается преинвазивных опухолей (CIS), хотя наличие интратубулярных SS предполагает, что их предшественником являются преинвазивные опухоли (Muller et al. , 1987).
Считается, что SS развиваются незаисимо, хотя на этот счет имеются некоторые сомнения. Основываясь на данных о том, что 40% SS является c- KIT позитивными, высказывается предположение, что по крайней мере некоторые из данных опухолей ведут свое начало от первичных половых клеток (Kraggerud et al. , 1999). Иммуногистохимический анализ с использованием PLAP показал гистологические отличия SS от других опухолевых клеток. В этих эксперментах SS характеризовались как негативные, в то время как другие герминогенные опухоли были позитивными (Manivel et al. , 1987). Методом прточной цитометрии было показано. что клетки SS могут быть как диплоидными. так и анеуплоидными (Takahashi 1993). Поскольку данный тип опухолей является редким (0. 2 на 100. 000; Burke and Mostofi 1993), сведения об их хромосомной конституции очень скудны.
Первые данные о хромосомной конституции SS были получены в 1973 г, когда были описаны 2 случая с 52 и 82 хромосомами соответственно (Atkin 1973). Результаты более поздних работ по определению плоидности данных типов клеток с использованием разных методов дали противоречивые результаты (Talerman et al. , 1984; Dekker et al. , 1992; Takahashi 1993; Looijenga et al. , 1994). В наших работах была впервые описана кариограмма SS клеток, показывающая их анеуплоидность и небольшое количество структурных аберраций (Rosenberg et al. , 1998). Исследования нашего экспериментального материала а также трех других образцов, включая билатеральные опухоли, с использованием CGH- технологии показали, что единственной специфической особенностью SS является сверхпредставленность хромосомы 9 (Rosenberg, Mostert et al. , 1998). Возможно, что относительная доброкачественность данного типа опухолей связана с тем, что наблюдаемый хромосомный дисбаланс связан с целыми хромосомами. Гибридизацией in situ с пробами специфичными для X и Y хромосомы была показана гетерогенность популяций опухолевых клеток. Видимо, это связано с тем, что гистологически эти опухоли представлены мелкими, средними и крупными клетками (Burke and Mostofi 1993; Cummings et al. , 1994; Eble 1994; Looijenga, Olie et al. , 1994). в каких взаимоотношениях находятся эти клеточные типы пока не установлено. Предполагается, что в этом отношении метод микродиссекций и CGH могут быть весьма перспективными (Looijenga et al. , 1999).
Предполагается, что SS происходят из сперматгониев B (Masson 1946; Rosai et al. , 1969; Romanenko and Persidskii 1983). Обнаружение одинаковых хромосомных аномалий в билатеральных SS ставит под сомнение это предположение. в качестве объяснения обнаруженным сходствам предлагается предположения о мутациях клеток зародышевых линий (de novo, или семейных), или о наличии метастазов. Оба предположения представляются маловероятными, поскольку семейные случаи SS не известны, метастазирования чистых SS также никогда не обнаруживалось. Недавно появившаяся новая гипотеза связана с обнаружением в SS клетках c- KIT (SCF) белка, который является маркером первичных половых клеток (Manova and Bachvarova 1991). Этот рецептор также был обнаружен в CIS и SE (Strohmeyer et al. , 1991; Strohmeyer et al. , 1995). Предполагается, что по крайней мере часть SS ведет свое происхождение от первичных (примордиальных) половых клеток (Kraggerud et al. , 1999), в которых мутации происходят до их миграции в гонадные зачатки. Эти разные модели могут также служить объяснением присутствия аналогичных хромосомных аберраций в билатеральных SS. Анализ уровней генной экспресии и особенностей мейоза могут быть информативными в данном случае.
Патогенетическое родство
Считается, что SS берут свое начало не от CIS, а от первичных (прмордиальных) половых клеток. Дискуссия по поводу общего или независимого патогенеза GCTI и TGCT от части связана с обнаружением CIS- подобных клеток в прилежащей паренхиме GCTI. Существует описание двух случаев, в которых предположение о присутствии данных клеток строится на данных о PLAP- позитивности и морфологии (Jacobsen 1992). Эти данные критикуются другими авторами (Parkinson and Ramani 1993). Следует отметить, что иммуногистохимический подход не может быть использован для идентификации CIS клеток в паренхиме яичка на первом году жизни, т. к. нормальная паренхима может содержать PLAP- позитивные половые клетки- предшественники (Jшrgensen et al. , 1993). Общий патогенетический путь для GCTI и TGCT представляется маловероятным также и в связи с их разной плоидностью.
В тоже время, имеются указания на то, что опухоли желточного мешка яичка детей могут содержать дополнительные копии 12p (Stock, Ambros et al. , 1995; Jenderny et al. , 1996), и даже i (12p) хромосому, которая детектируется с помощью FISH- методики (Stock, Ambros et al. , 1995). Правда, последний результат не подтверждается кариотипированием (Perlman, Cushing et al. , 1994). На нашей небольшой выборке мы также не обнаружили присутствия экстра копий 12p. Мы действительно показали наличие в трех из пяти опухолях желточного мешка дополнительных фрагментов 12p, но эти фрагменты отличались от тех, которые обнаруживаются в TGCT. Мы предполагаем, что в ряде случаев обнаружения опухолей с i (12p) у детей речь идет об опухолях взрослого типа у мальчиков с ранним половым созреванием.
Дополнительными свидетельствами в пользу независимого патогенеза GCTI и TGCT являются данные эпидемиологических и иммуногистохимических исследований. В отличае от TGCT, подъема частоты GCTI не наблюдается. В то время как P53 белок обнаруживается в клетках TGCT (Schenkman et al. , 1995; Guillou et al. , 1996), он не детектируется в GCTI клетках.
Описаны животные модели GCTI и TGCT. Тератокарциномы мыши вероятнее всего передставляют модель GCTI (Walt et al. , 1993), демонстрируя ту же , способность пргрессировать в опухоли желточного мешка (van Berlo et al. , 1990). Семиномы собак вероятнее всего представляют модель SS опухолей человека (Looijenga, Olie et al. , 1994). Отсутствие животных моделей TGCT подчеркивает специфичность данного типа опухолей для человека.
Таким образом, представленные данные подтверждают независимые генетические пути GCTI, TGCT и SS.
Амплификация 12p в TGCT
Данные кариотипирования, FISH- и CGH- анализов показывают наличие в TGCT дополнительных доз целого короткого плеча хромосомы 12. В большинстве случаев это событие детектируется как присутствие i(12p). FISH- аназиз с использованием центромеро- специфической пробы в качестве гибридизационного зонда считается подходящим методом для детектирования i(12p) в интерфазном ядре (Mukherjee et al. , 1991; Rodriquez et al. , 1992). Хотя согласно нашим данным этот метод не является достаточно надежным, он может быть усовершенствован дополнительным применением FISH с двумя гибридизационными пробами, специфичными к центромере и к короткому плечу хромосомы 12. Для этих целей могут быть также успешно использованы цветные зонды, специфичные к короткому и длинному плечу хромосомы 12 (Blough et al. , 1997; Blough et al. , 1998).
Хотя образование изохромосомы 12 и не является первой стадией патогенеза TGCT (Geurts van Kessel et al. , 1989), постоянное присутствие этих структур в клетках инвазивных опухолей указывает на то, что присутствие экстра копий генов расположенных в коротком плече хромосомы 12 играет важную роль в развитии этого типа опухолей. Идентифицировать гены, вовлеченные в этот процесс очень трудно, поскольку размер короткого плеча составляет 40 Mb, и оно содержит 2000 - 4500 генов (http: // www. ncbi. nlm. nih. gov/ genemap). Нами, а также рядом других авторов были описаны TGCT опухоли, в клетках которых обнаруживались амплификации ограниченных районов 12p (Suijkerbuijk et al. , 1994; Korn, Olde Weghuis et al. , 1996; Mostert, Van de Pol et al. , ). Можно предположить, что если важные с точки зрения развития рака гены распологаются в амплифицируемом районе, то изучение TGCT с такими амплификациями и без них может пролить свет на биологическую роль экстра дозы 12p в развитии TGCT. С этой целью мы исследовали амплификацию 12p в ряде TGCT опухолей. Данная амплификация была обнаружена в 8% случаев, в основном в SE. Следует также отметить, что в клетках с амплификацией не обнаруживались i хромосомы. Данный факт указывает на то, что существуют два альтернативных механизма приобретения дополнительных копий 12p. которые связаны с биологией данных опухолей.
FISH- анализ показал. что наличие 12p амплификации ассоциировано с инвазивным ростом. Показано наличие 12p амплификации в инвазивных опухолях, микро- инвазивных клетках SE, но не в CIS. Присутствие данной хромосомной аберрации практически во всех SE указывает на два возможных в этих случаях пути развития - рост или ингибирование апоптоза. Последняя воможность подтверждена с помощью ДНК- фингерпринтинга (Olie et al. , 1996) и анализом выживаемости клеток in vitro. Следует отметить. что SE с амплификацией 12p возникают в более раннем возрасте. Корреляции с клинической стадией болезни и с результативностью лечения отмечено не было. Амплификация 12p не имеет прогностического значения для NS.
Несмотря на то, что описана достаточно большая серия TGCT с амплификациями 12p, наименьшая зона перекрытия амплификаций (SHROA), осталась в прежних пределах. Похоже, что точки разрывов ампликонов кластерируются в определенных местах, предполагая вовлеченность многих генов в этот процесс. К настоящемку моменту в зоне SHROA картированы три гена: SOX5, JAW1 и KRAS2. Мы предполагаем, что наиболее вероятным кандидатом является ген KRAS2 (Olie et al. , 1995). Мутации KRAS2 также не имеют прогностического значения.
Дальнейшие перспективы
Многие вопросы до сих про не решены. это касается раннего развития и, в особенности, генов вовлеченных в процесс образования герминогенных опухолей. Исследования семей с предрасположенностью к определенномку типу рака представляется весьма многообещающим для выяснения молекулярных механизмов. В случае TGCT генетическая предрасположенность выявлена у 25- 33% больных (Nicholson and Harland 1995). Поиск генов предрасположенности в опухолях этих больных показал. что наиболее вероятными местами их локализации являются хромосомы 3, 5, 12 и 18 (Leahy et al. , 1995). Несомненно, предположение о существовании генов предрасположенности требует проведения более обширного семейного анализа. если окажется, что идентифицированные гены являются опухолевыми супрессорами, то результаты этих исследований должны быть сопоставлены с данными LOH- анализа (Murty et al. , 1994; Peng et al. , 1999).
Биологическое значение присутствия экстра копий генов 12p в развитии TGCT остается пока невыясненной. В этой связи интересными представляются исследования малого числа копий 12p в CIS, и их возможного увеличения в процессе инвазивного роста. Окончательное решение этоой проблемы будет достигнуто с развитием новых методов исследования in vitro и созданием подходящих животных моделей.